Quick-DNA fenol extraction
Reactivo para extracción DNA genómico a partir de células y tejidos (sólidos o líquidos) utilizando el protocolo estándar de Fenol-Cloroformo-Isoamílico 25:24:1 V/V.
Quick-DNA++ permite la obtención de DNA de gran integridad y pureza, libre de contaminantes. Brinda sensibilidad mejorada cuando se utiliza el DNA carrier (incluido en el producto), ayuda en la extracción de fracciones minoritarias durante la precipitación con etanol.
Conservación: Almacenar entre 4ºC y 15ºC y al abrigo de la luz.
Presentación: 100 ml
Protocolo de extracción de DNA
1- Homogenización
El punto de inicio es el homogenato de células o tejido de origen, en cantidad mayor a 50-100 mg de tejido o 1×106 células.
2- Separación de las fases
Añadir un volumen de Quick-DNA++ (tomado de la fase inferior) y 10 ul de DNA carrier por cada 400 ml de Quick-DNA++ (puede ajustarse en caso de ser requerido) y colocar en vortex a 550 rpm y 25 °C durante 10 minutos. Centrifugar a 12.000g durante 5 minutos.
3- Precipitación de DNA
Transferir la fase acuosa a un nuevo tubo añadir 0,02 volúmenes de solución de NaCl 5M ó 0,1 volúmenes de acetato de Sodio 3 M (no incluidos).
Añadir 0,8 volúmenes de isopropanol (no incluido) al 100%, mezclando por inversión e incubar en congelador -20ºC por 30 minutos. Centrifugar a 12.000g durante 5 minutos. Descartar el sobrenadante y agregar 250 ml de etanol (no incluido) al 70%. Mezclar por inversión e y centrifugar a 15.000g durante 5 minutos.
Finalmente, descartar el sobrenadante y dejar secar los tubos bajo campana de bioseguridad durante 15 a 30 minutos.
4- Redisolución
Resuspender el DNA seco en 200 μL de Tris-HCl 10mM, pH 8.0 para preparar la solución nativa de DNA genómico a la concentración deseada.
5- Cuantificación
Cuantificar el DNA por espectrofotometría a 260 nm. Almacenar la solución nativa de DNA en congelación a -80°C.